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Jessica
Vor 2 Tagen
25 Minuten gelesen

Luftspray findet am 24. Mai 2022 in ganz Kanada statt. Sollten wir uns Sorgen machen und ist das sicher!?
In diesem Blogbeitrag finden Sie alle Recherchen und Informationen, die mein Mann und ich in den letzten Wochen in Bezug auf Foray 48B (Bacillus thuringiensis subsp. Kurstaki (Btk) und BoVir (Baculovirus) gesammelt haben . Wir möchten uns bei allen bedanken unsere Leser und unsere Zuschauer, die uns Berichte, Telefonanrufe und E-Mails direkt geschickt haben, um Ihre Bedenken zu äußern oder uns mitzuteilen, was Sie gefunden haben, nachdem Sie sich unsere Videos auf YouTube, Instagram angesehen oder Kevins letztes Interview auf der angehört haben Podcast: Mississauga Keeping It Real with Bhanu.


Hören Sie hier auf Mississauga Keeping It Real


Wir sind sehr besorgt über diese biologischen Insektizide, die in unseren Städten von oben aus der Luft versprüht werden, und deshalb möchten wir, dass andere sich der potenziellen Gefahren und gesundheitlichen Beeinträchtigungen bewusst sind, die dies auch für Sie und Ihre Familie darstellen kann. Aus diesem Grund haben wir diesen Blogbeitrag erstellt und alle Videos, die wir zu diesem Thema gemacht haben, unten mit einigen der Referenzartikel angehängt, die wir zu ihrer Erstellung verwendet haben, damit Sie auch wissen, was wir entdeckt haben.



Was sprühen sie auf uns? | Gypsy Moths & The EMF Connection (Unser erstes Video)



Verweise


1. Überprüfung der Stadtpläne, wie dies umgesetzt werden soll


2. Um die Insektizidchemikalie zu überprüfen, die sie hier in Mississauga auf uns sprühen werden


3. Überprüfung der ELF-Magnetfeldstudie, die an Schwammspinnern durchgeführt wurde


4. Um zu überprüfen, wie elektromagnetische Strahlung das Immunsystem des Körpers beeinträchtigen kann, klicken Sie auf diese PubMed-Studie, die besagt, dass strengere Regeln und Vorschriften in Bezug auf EMF umgesetzt werden müssen, um die menschliche Gesundheit zu schützen


Bild bei 2:08 Min.: Lebenszyklus der Schwammspinner Dieses Bild wurde mit freundlicher Genehmigung von www.london.ca zur Verfügung gestellt





Umweltgifte & Bindemittel | Was ist BTK?
(Unser zweites Video)



Verweise


1. Unterschiedliche Nebenwirkungen des Bioinsektizids Bacillus thuringiensis auf Nichtziel- Drosophila - Fliegen


2. Bt-Toxin-Mais: Gefährlich für zukünftige Generationen


3. Symptombeschwerden nach Sprühen aus der Luft mit dem biologischen Insektizid Foray 48B



Bindemittel & Ergänzungen | So schützen Sie sich vor Umweltgiften


Alle unsere Links : https://campsite.bio/thehealinghandsduo


1. Aktivkohle (Kokoskohle im Abschnitt „Ergänzungen“)


2. Lebender Calcium-Bentonit-Ton (Suchen Sie diesen kanadischen Laden hier)


3. Flüssig-/Spray -Zeolithe (Code beim Erstkauf: 5 % RABATT: HEALTHY5


4. Fulvinsäure


5. Red Pine Needle Oil (natürliches antimikrobielles)


6. Nasenspray (jemand schlug vor, dass kolloidales Silber helfen könnte, suchen Sie diese Firma hier erneut nach dieser Marke: Sovereign Silver Bio-Active Silver Hydrosol Nasenspray 29 ml):


oder ich arbeite auch mit dieser Firma, Microbalance Health Products: The Breath Easy Kit , und habe ihre orale Formel dieses Produkts ausprobiert und es hat sehr gut funktioniert.


Hier ist ein ziemlich interessanter Artikel über die Verwendung von Manukahonig in Ihren Nasengängen, um Krankheiten durch eingeatmete Krankheitserreger zu verhindern: Ist Honig wirklich gut für Ihre Nasennebenhöhlenentzündung? Von: Advanced Sinus & Allergy Center


7. Oral-/Tinkturspray (das ich immer in meiner Handtasche trage):


8. EMF-Schutzprodukte finden Sie hier im Abschnitt EMF. Für persönlichen Skalarschutz finden Sie Ihr Land in unseren Links unter Blushield und verwenden Sie den bereitgestellten Rabattcode, um entweder 5 % - 10 % Rabatt auf Ihre gesamte Bestellung zu erhalten.


9. Wasserstoffperoxid 3% Lebensmittelqualität : Sie können dieses entweder mit Wasser oder Kochsalzlösung für verschiedene Anwendungen verdünnen: Die Marke ist Essential Oxygen oder dieses: Oral Rinse By Essential Oxygen . Das beste Mittel zur Desinfektion Ihrer Raumluft ist das, das bereits Nelken enthält, oder fügen Sie einfach etwas Thieves-Öl zu einem von ihnen hinzu. Sie können die Mundspülformel in den Diffusoren oder Luftbefeuchtern Ihrer ätherischen Öle in voller Stärke verwenden, aber die 3%ige Lösung muss verdünnt werden. KLICKEN SIE HIER für ein Beispiel. Wenn Sie jedoch wissen möchten, wie Sie Wasserstoffperoxid in Lebensmittelqualität sicher verwenden können, lesen Sie bitte diese Website hier: The One-Minute Cure: The Secret to Healing Nearly All Diseases.


Es ist auch ratsam, in ein hochwertiges Raumluftreinigungssystem zu investieren , mit dem wir in Kürze mit mehreren Unternehmen zusammenarbeiten werden. Daher möchten Sie vielleicht unsere Website/Links mit einem Lesezeichen versehen, um in naher Zukunft wieder bei uns vorbeizuschauen.


10. Schließlich sollte jeder vor und nach dem Luftspray eine Art Infrarot- oder Energiesauna-Sitzung in Betracht ziehen , um den Körper tief zu entgiften und alle fremden Toxine oder Biotechnologien (Umweltschadstoffe ) zu entfernen . 5-10 Sitzungen sind ratsam. Für weitere Informationen zu unseren Dienstleistungen klicken Sie bitte HIER.


Aufgrund der Möglichkeit, nach Erhalt einer der COVID-19- Injektionen eine Myokarditis oder Mikroblutgerinnsel zu entwickeln, sind wir derzeit der Meinung, dass jeder, der in den letzten 6 Monaten eine dieser Injektionen erhalten hat, kein Hauptkandidat für die Verwendung unserer ist Equipment aus unserer privaten Studioumgebung. Wenn seit Ihrer letzten Injektion 6 Monate vergangen sind und keine Anzeichen einer Herzentzündung oder Kreislaufprobleme vorliegen, können Sie sich mit uns in Verbindung setzen, um einen Termin zu vereinbaren, werden jedoch gebeten, einen Haftungsausschluss zu unterzeichnen. Weitere unabhängige, wissenschaftlich fundierte Beweise, um die Kanadier über die wahren Fakten rund um COVID-19 zu informieren, finden Sie in der Canadian Covid Care Alliance . Danke!



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Um die Insektizidchemikalie zu überprüfen, die sie hier in Mississauga auf uns sprühen werden




Überprüfung der ELF-Magnetfeldstudie, die an Schwammspinnern durchgeführt wurde
Die Auswirkungen einer akuten Magnetfeld-Exposition auf die morphometrischen Eigenschaften von Bombyxin-produzierenden neurosekretorischen Neuronen in Schwammspinner-Raupen
Larisa Ilijin 1, Milena Vlahović , Marija Mrdaković , Dejan Mirčić , Zlatko Prolić , Jelica Lazarević , Vesna Perić-Mataruga
Zugehörigkeiten erweitern
PMID: 21219112 DOI: 10.3109/09553002.2011.542544
Abstrakt
Zweck: Untersuchung der Auswirkungen einer akuten Exposition bei starken statischen Magnetfeldern und extrem niederfrequenten Magnetfeldern auf neurosekretorische Neuronen, die insulinähnliche Neurohormone synthetisieren.

Materialien und Methoden: Der immunzytochemische Nachweis von Bombyxin-ähnlichem Material in den protozerebralen neurosekretorischen Neuronen von Lymantria dispar-Raupen wurde unter Verwendung eines monoklonalen Antikörpers durchgeführt, der gegen ein synthetisches Dekapeptid gerichtet war, das dem N-Terminus der Bombyxin-A-Kette entspricht. Die Raupen wurden drei Tage lang starken statischen Magnetfeldern (235 mT) und extrem niederfrequenten Magnetfeldern (2 mT) nach der Häutung in das 4. Larvenstadium ausgesetzt.

Ergebnisse: Wir berichten über das Vorhandensein von immunreaktiven Molekülen in medialen neurosekretorischen Neuronen (nsn) vom Typ A2 im Raupengehirn von L. dispar. Die dreitägige Exposition von Raupen bei stresogenen externen Magnetfeldern veränderte die Größe von A2-Typ-nsn, ihre Kerne und die Intensität der Proteinbande im Bereich der Bombyxin-Molekülmasse (4–6 kD) nach der Exposition bei extrem niederfrequenten Magnetfeldern Vergleich mit der Kontrollgruppe und der Gruppe, die mit starken statischen Magnetfeldern behandelt wurde.

Schlussfolgerung: Dies sind die ersten Daten zum Einfluss externer Magnetfelder auf den polyphagen phytophagen Waldschädling L. dispar L. (Lepidoptera: Lymantridae), die auf eine intensive Synthese von insulinähnlichem neurosekretorischem Material hinweisen.

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Int J Radiat Biol. 2008 Feb;84(2):91-8. doi: 10.1080/09553000701797047.
PMID: 18246478
Bombyxin: ein Insekten-Neurohormon, das auf die Eierstöcke von Lepidoptera abzielt.
Fullbright G, Lacy ER, Büllesbach EE.
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PMID: 9274060
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PMID: 7473749
Die hirnsekretorischen Peptide, die die Häutung und Metamorphose des Seidenspinners Bombyx mori steuern.
Ishizaki H, Suzuki A.
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PMID: 7981038 Überprüfung.
Rolle von Neuropeptiden bei der Produktion von Sexualpheromonen in Motten.
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PMID: 15374650 Überprüfung.
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PMID: 25475617
Zusammenhang zwischen Magnetfeld-Exposition und Embryonalentwicklung im ersten Trimester.
Su XJ, Yuan W, Tan H, Liu XY, Li D, Li DK, Huang GY, Zhang LW, Miao MH.
Plus eins. 30. Juni 2014;9(6):e101050. doi: 10.1371/journal.pone.0101050. eCollection 2014.
PMID: 24977708 Kostenloser PMC-Artikel.

Forschungsunterstützung, Nicht-US-Regierung

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Um zu überprüfen, wie elektromagnetische Strahlung das Immunsystem des Körpers beeinträchtigen kann, klicken Sie auf diese PubMed-Studie, die besagt, dass strengere Regeln und Vorschriften in Bezug auf EMF umgesetzt werden müssen, um die menschliche Gesundheit zu schützen

Störung des Immunsystems durch elektromagnetische Felder – Eine möglicherweise zugrunde liegende Ursache für Zellschäden und eine Verringerung der Gewebereparatur, die zu Krankheiten und Beeinträchtigungen führen kann
Olle Johannsson 1
Zugehörigkeiten erweitern
PMID: 19398310 DOI: 10.1016/j.pathophys.2009.03.004
Abstrakt
Eine Reihe von Artikeln, die sich mit den Auswirkungen moderner, vom Menschen verursachter elektromagnetischer Felder (EMF) auf das Immunsystem befassen, sind in der vorliegenden Übersicht zusammengefasst. EMFs stören die Immunfunktion durch Stimulierung verschiedener allergischer und entzündlicher Reaktionen sowie durch Auswirkungen auf Gewebereparaturprozesse. Solche Störungen erhöhen das Risiko für verschiedene Krankheiten, einschließlich Krebs. Diese und die EMF-Wirkungen auf andere biologische Prozesse (z. B. DNA-Schäden, neurologische Wirkungen usw.) treten nun weithin bei Expositionsniveaus auf, die deutlich unter den meisten aktuellen nationalen und internationalen Sicherheitsgrenzwerten liegen. Offensichtlich sind biologisch basierte Expositionsstandards erforderlich, um eine Störung normaler Körperprozesse und mögliche nachteilige gesundheitliche Auswirkungen einer chronischen Exposition zu verhindern. Basierend auf dieser Bewertung,

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Klimek A, Rogalska J.
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PMID: 33572550 Kostenloser PMC-Artikel. Überprüfung.

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34778597/






Differenzielle Nebenwirkungen des Bioinsektizids Bacillus thuringiensis auf Nichtziel- Drosophila - Fliegen
Bioinsektizide auf Basis von Sporen und Toxinen von Bacillus thuringiensis ( Bt ) sind zunehmend beliebte alternative Lösungen zur Bekämpfung von Schadinsekten, mit potenziellen Auswirkungen ihrer Anreicherung in der Umwelt auf Nichtzielorganismen . Hier testeten wir die Auswirkungen einer chronischen Exposition gegenüber kommerziellen Bt - Formulierungen ( Bt var. kurstaki und israelensis ) auf acht Nichtziel- Drosophila - Arten, die in Bt -behandelten Gebieten vorkommen, einschließlich D. melanogaster (vier Stämme) . Dosen bis zu den für die Feldanwendung empfohlenen (~ 10 6Colony Forming Unit (CFU)/g Fliegenmedium) hatte keinen Einfluss auf die Fliegenentwicklung, während bei ≥ 1000-fach dieser Dosis keine Fliege schlüpfte. Dosen zwischen dem 10- bis 100-fachen der empfohlenen Dosis verlängerten die Entwicklungszeit und verringerten die Schlupfraten der adulten Tiere in dosisabhängiger Weise mit art- und stammspezifischen Wirkungsamplituden. Mit Fokus auf D. melanogaster waren die Entwicklungsveränderungen auf die vom Stadium abhängige Larvensterblichkeit zurückzuführen, und die Langlebigkeit und die Anzahl der Nachkommen erwachsener Fliegen, die während ihrer gesamten Entwicklung Bioinsektiziden ausgesetzt waren, wurden moderat beeinflusst. Unsere Daten deuten auch darauf hin, dass eine Synergie zwischen den Formulierungsbestandteilen (Sporen, gespaltene Toxine, Zusatzstoffe) die bioinsektiziden Wirkungen auf die Larvenentwicklung induzieren könnte. Obwohl die empfohlenen Dosen keine Auswirkungen auf Nichtziel- Drosophila hattenArt, Missbrauch oder lokale Anreicherung von Bt -Bioinsektiziden in der Umwelt könnten Nebenwirkungen auf Fliegenpopulationen mit potenziellen Auswirkungen auf die mit ihnen verbundenen Gemeinschaften haben.

Einführung
Die Weltbevölkerung wird bis 2050 voraussichtlich mehr als 9,7 Milliarden Menschen erreichen 1 , wodurch die Nachfrage nach Nahrungsmitteln steigen wird. Dies erfordert die Bekämpfung von Schädlingen, insbesondere Schadinsekten, die mehr als 30 % der landwirtschaftlichen Verluste verursachen 2 . Heutzutage stützt sich ihre Bekämpfung stark auf chemische Insektizide. Ihre Verwendung wird jedoch aufgrund des Auftretens von Resistenzen, des Auftretens sekundärer Schädlinge, der nachteiligen Nebenwirkungen auf Nichtzielarten (natürliche Feinde der Schädlinge, Bestäuber) 3 , 4 und vor allem der Auswirkungen auf die menschliche Gesundheit allmählich reduziert und Biodiversität 5 , 6. Bioinsektizide, die als spezifischere und sicherere Alternativen entwickelt wurden, stellen 5 % des Pestizidmarkts dar, wobei die große Mehrheit mikrobielle Insektizidformulierungen sind, die auf lebensfähigen Sporen und Toxinen des Bakteriums Bacillus thuringiensis ( Bt ) basieren (über 400 registrierte Formulierungen) 4 , 7 .

Bt ist ein Gram-positives Endosporen-bildendes Bakterium, das eine Vielzahl von Toxinen mit unterschiedlichen chemischen Strukturen, Wirkungsweisen und biologischen Zielen synthetisiert. Die am häufigsten vorkommenden und untersuchten sind Cry-δ-Endotoxine, die von Genen kodiert werden, die sich auf großen Plasmiden befinden und als parasporale kristalline Einschlüsse während der stationären Wachstumsphase 8 , 9 produziert werden . Bt produziert andere insektizide Toxine, Cyt (zytolytische δ-Endotoxine) und Vip (sekretierte vegetative insektizide Proteine), die ihre Wirkungen mit Cry-Toxinen synergieren, Virulenzfaktoren wie β-Exotoxine (oder Thuringiensin), ein sezerniertes Nukleotid, das für fast alle getesteten toxisch ist Lebensformen, die daher in kommerziellen Formulierungen verboten sind 10 , und Anti-Pilz-Faktoren 11. Bt- Unterarten und -Stämme können sich in ihrer Plasmidzahl und in dem für ihre biologische Aktivität verantwortlichen synthetisierten Toxincocktail unterscheiden, der potenzielle Zielinsekten bestimmt 12 . Zum Beispiel Bt var. kurstaki ( Btk ), das hauptsächlich gegen Schmetterlingslarven eingesetzt wird, produziert 5 Cry-Toxine (Cry1Aa, Cry1Ab, Cry1Ac, Cry2Aa und Cry2Ab) 13 , während Bt var. israelensis ( Bti ), das hauptsächlich gegen Stechmücken und Kriebelmücken eingesetzt wird, produziert eine Kombination aus Cry4Aa, Cry4Ba, Cry10Aa und Cry11Aa 14 . Die verschiedenen Toxin-Cocktails, die von einigen BtUnterarten können auch für Nicht-Insekten-Organismen wie Nematoden, Protozoen und sogar Weichtiere schädlich sein 12 .

Die Bioinsektizidformulierungen auf Basis von Sporen und Toxinkristallen von Btk und Bti werden am häufigsten in der ökologischen und konventionellen Landwirtschaft sowie in natürlichen Gebieten (z. B. Wäldern, Sümpfen) gespritzt. Es ist allgemein anerkannt, dass die Toxinkristalle, sobald sie von Insektenlarven aufgenommen wurden, durch den alkalischen pH-Wert des Mitteldarms aufgelöst werden und ~ 130 kDa große Protoxine freisetzen, die dann von Verdauungsproteasen zu kleineren, löslichen, aktiven Toxinfragmenten von ~ 60–70 kDa verarbeitet werden 15 , 16 . Aktive Toxine binden an spezifische Rezeptoren von Epithelzellen des Mitteldarms und lösen Porenbildung in der Zellmembran, Zelllyse und Desorganisation des Darmepithels aus 17 . Dadurch können Darmbakterien, einschließlich Bt, das Hämocoel zu kolonisieren, und führt zu einer schnellen Blutvergiftung und zum Tod 18 .

Zahlreiche Wirkungsstudien zu Ausbringungsmengen im Feld und akuten Vergiftungen haben gezeigt, dass Bt -Bioinsektizide sicher sind oder eine begrenzte Wirkung auf Nicht-Ziel-Vertebraten und wirbellose Tiere und assoziierte Artengemeinschaften haben 19 , 20 . Der zunehmende Einsatz von Bioinsektiziden auf der Basis von Bt - Sporen und -Toxinen hat jedoch in letzter Zeit Anlass zur Sorge gegeben 21 und zur Bewertung ihrer potenziellen Auswirkungen auf Nichtzielarten geführt, wie z Lebensraum mit Bt -gerichteten Schadinsekten 24 , 25 , 26. Es gibt zunehmend Hinweise auf direkte und indirekte Kreuzwirkungen von Bt - Bioinsektizidformulierungen und Bt -Cry- und Cyt-Toxinen über Insektenarten und -ordnungen oder sogar über Phyla hinweg, was darauf hindeutet, dass das Bt - Targeting nur teilweise spezifisch ist 12 , 26 , 27 . Die Daten zeigten auch, dass fast die gesamte Dosis der aufgetragenen Btk- Formulierung noch 72 Stunden nach dem Besprühen auf der Blattoberfläche vorhanden war 28 , wobei ihre Menge nur 28 Tage nach der Behandlung wieder in die Nähe der Umweltwerte zurückkehrte 29 . Schließlich können Bt- Sporen Monate und sogar Jahre nach der Anwendung im Boden und auf verschiedenen Untergründen überleben 30, 31 , 32 , 33 . Bt -Formulierungen enthalten auch verschiedene Verbindungen, um Sporen und Kristalle zu schützen und sie in eine benetzbare Form zu aggregieren, Tenside, um das Sprühen und Verteilen auf Pflanzen zu erleichtern, und Phagostimulanzien 34 , 35 . Da jedoch Toxinkristalle und in viel geringerem Maße Sporen 36 etwas empfindlich gegenüber abiotischen Bedingungen (z. B. UV, pH-Wert, Niederschlag) sind, wird häufig wiederholtes Sprühen mit einer Mindestverzögerung von 3 bis 8 Tagen über den Zeitraum des Auftretens von Schädlingen empfohlen um die erforderliche Schädlingsbekämpfungsstufe 35 , 37 zu erreichen ( https://www.certiseurope.fr ;https://www.certisusa.com ). All dies kann möglicherweise zu einer Anreicherung von Bt in der Umwelt führen, wodurch das selten angesprochene Problem möglicher Nebenwirkungen einer chronischen Exposition (dh kontinuierliche und zunehmende Expositionsdosis über einen längeren Zeitraum) von Nichtzielarten mit unerwartet höheren Dosen aufgeworfen wird empfohlen.

Diptera sind weltweit verbreitete Insekten, von denen die meisten nicht Ziel kommerzieller Bt- Formulierungen sind. Dies ist der Fall bei der Gattung Drosophila , vertreten durch ca. 1500 beschriebene Arten 38 , einschließlich des Modellorganismus Drosophila melanogaster . Auf dem Feld ernähren und vermehren sich die meisten dieser Fliegen hauptsächlich von reifenden oder verrottenden/fermentierenden Früchten und kommen daher natürlicherweise in mit Bt behandelten Gebieten wie Obstplantagen, Weinbergen und Gartengebieten vor. Frühe Entwicklungsstadien von Drosophila können sich nicht zwischen Nahrungsflecken verteilen, fressen intensiv und wachsen exponentiell 39 und können daher hohe Dosen von Bt aufnehmenBioinsektizide, die sich während der Behandlungszeiträume angesammelt haben. Überraschenderweise haben sich trotz des Vorkommens vieler Drosophila - Arten in Bt- behandelten Gebieten, ihrer Rolle beim Abbau organischer Stoffe und der einfachen Untersuchung einiger Arten nur wenige Studien auf diese Fliegen konzentriert. Die meisten von ihnen schlugen jedoch eine Anfälligkeit für Btk vor, aber sie verwendeten hauptsächlich Larven im späten 3. Stadium, die sich auf die Verpuppung vorbereiten, die nicht viel fressen. Darüber hinaus wurden in diesen Studien Bt -Präparate verwendet, insbesondere Feldisolate, die möglicherweise hochtoxische β-Exotoxine enthielten, die in kommerziellen Bt - Formulierungen nicht zugelassen sind 40 , 41 , 42 ,43 , 44 , 45 , 46 , 47 . Bisher befasste sich keine Studie mit den Auswirkungen einer chronischen Exposition gegenüber kommerziellen Bt -Formulierungen auf Entwicklungsstadien dieser Zweiflügler, die in mit Bt behandelten Gebieten vorkommen.

Hier testeten wir die chronischen Nebenwirkungen kommerzieller Formulierungen von Btk und in geringerem Maße von Bti auf Drosophila - Fliegen ( D. melanogaster und sieben andere Drosophila -Arten), die nicht zur Zielgruppe gehören, mit Dosen, die von den mittleren empfohlenen Sprühdosen bis zu ~ das 1000-fache dieser Dosis (dh unterhalb der in den meisten Studien verwendeten akuten Intoxikationsdosen). Wir konzentrierten uns hauptsächlich auf Entwicklungsmerkmale (Entwicklungszeit, Schlupfrate), aber auch auf zwei fitnessbezogene Merkmale (Langlebigkeit und Anzahl der Nachkommen) von erwachsenen Fliegen, die sich aus dem Ei unter Exposition gegenüber der Btk - Formulierung entwickelt haben. Unsere Studie wäre ein erster Schritt bei der Erforschung möglicher Auswirkungen einer chronischen Btk -ExpositionFormulierung auf Drosophila- Fliegen.

Ergebnisse
Btk -Formulierungen beeinträchtigen die Entwicklung von D. melanogaster
In einem Dosis-Wirkungs-Assay wurden die Emergenzraten (ER) und Entwicklungszeiten (DT) von Canton-S-Fliegen des Wildtyps D. melanogaster , die Dosen von bis zu 10 7 KBE/g DELFIN A in einem Standard-Low-Protein/High- Zuckerfliegenmedium waren ähnlich denen der nicht exponierten Kontrollgruppe (Abb. 1 a, b; Tabelle 1 ). Bei höheren Dosen wurden sowohl ER als auch DT dosisabhängig beeinflusst: ER wurde um 17 % bei 5 × 10 7 KBE/g (wenn auch nicht statistisch signifikant) reduziert, bis zu 100 % bei 10 9 KBE/g die kein Individuum das Puppenstadium erreichte. Die tödliche Dosis 50 (LD50) wurde zwischen 5 × 10 7 und 10 8 KBE/g geschätzt (Abb. 1a). DT wurde um etwa 0,5 Tage bei 5 × 10 7 CFU/g (+ 4 % gegenüber Kontrollen) auf bis zu 1,5 Tage (+ 14 %) bei 10 8 CFU/g erhöht ( 1b ; Tabelle 1 ). Das Geschlechterverhältnis beim Auflaufen (SR, Anteil der Männchen) war mit 10 8 KBE/g stark zugunsten der Männchen verzerrt, mit 58 % mehr Männchen im Vergleich zur Kontrolle (Ergänzende Information S2 ).

Abbildung 1
Abbildung 1
Entwicklung von D. melanogaster Canton S-Fliegen auf kommerziellen Btk- und Bti- Formulierungen. ( a ) Auflaufrate und ( b ) Entwicklungszeit (Mittelwert ± SEM) von 20 anfänglichen Eiern bei steigenden Dosen von Btk DELFIN A (rote Dreiecke), dem Cry-free Btk 4D22 (offene Lutschtabletten), dem auf Mücken gerichteten Bti VectoBac WG (grüne Quadrate) und der nicht-pathogene Bacillus subtilis (hellgraue Kreise). Für VectoBac WG und B. subtilis N  = 4–7 pro Dosis ; für DELFIN A und Btk 4D22,N  = 9–12 für die Kontrolle, N  = 3 für 5,10 5 und 10 9 , N  = 4–9 für 10 6 , N  = 7–14 von 5,10 6 bis 10 8 . ( c ) Emergenzrate (Mittelwert ± SEM) und ( d ) Entwicklungszeit (Mittelwert ± SEM) bei steigenden Dosen der beiden Btk- Formulierungen DELFIN B (dunkelrote Kreise) und Scutello DF (orangefarbene Quadrate). N  = 4 Wiederholungen von 20 Eiern pro Dosis und Formulierung, außer für Kontrollen und 10 8 CFU/g DELFINB (9–10 Wiederholungen von 20 Eiern). Ergebnisse von Post-hoc-Vergleichen jeder Dosis mit der Kontrolle: • 0,05 <  P  < 0,1; *0,01 <  P  < 0,05; **0,001 <  P  < 0,01; *** P  < 0,001. ( e ) Immunoblotting mit einem polyklonalen Anti-Cry1A-Antikörper auf Proteine ​​aus einer Suspension von im Labor hergestellten Sporen von Cry-free Btk 4D22, den drei Btk - Formulierungen DELFIN A, B, Scutello DF und einer Suspension von im Labor hergestellten Cry1A-Toxinen. Rote Sternchen zeigen die Cry-Protoxine (~ 130 kDa) und die aktivierten Fragmente (~ 60 kDa und ~ 70 kDa) an.

Bild in voller Größe
Tabelle 1 Ergebnisse statistischer Analysen zur Bewertung der Wirkung der Formulierungsdosis/Sporenproduktion und ihrer Wechselwirkung mit der Behandlung, dem Larvenstadium, dem Versuch, dem Geschlecht, dem Fliegenstamm und der Fliegenart, falls zutreffend.
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Wir beobachteten keine Änderung des ER unter Verwendung des gleichen Dosisbereichs des Cry-freien Btk -Stamms 4D22 (Abb. 1a , e; Tabelle 1 ) und des nicht-pathogenen Bacillus subtilis (Abb. 1a , Tabelle 1 ), zwei Kontrollen für die Wirkung der Aufnahme hoher Sporenmengen. Im Gegensatz dazu ist die Zugabe der Formulierung von Bt Var. israelensis VectoBac WG reduzierte ER um 89 % nur bei 10 9 KBE/g (~ 2000-fache empfohlene Dosis; Abb. 1a ; Tabelle 1 ; Zusatzinformation S1 ). DT variierte mit der Dosis von Btk 4D22, wobei die Unterschiede hauptsächlich zwischen den Dosen bestehen, aber nicht mit der Kontrolle. DT stieg um ~ 1,5 Tage bei der höchsten Dosis von VectoBac WG (Abb. 1b ; Tabelle 1 ) und zeigte einen ähnlichen Trend bei B. subtilis ( P  = 0,06; Abb. 1b ; Tabelle 1 ). Keine dieser Behandlungen beeinflusste die SR dramatisch (Ergänzende Informationen S2 ).

Um zu testen, ob diese Wirkungen generisch für Btk - Formulierungen sind, wurde die Fliegenentwicklung an zwei anderen Formulierungen, DELFIN B (gleiche Marke) und Scutello DF (Marke Dipel), bei den kritischen Dosen 10 8 und 10 9 CFU/g bewertet. Als DELFIN A enthalten diese Formulierungen Sporen und Cry-Toxine wie Cry-1A als Protoxine von ~ 130 kDa, aktivierte Toxine von ~ 60–70 kDa, aber auch als kleinere Fragmente 20 (Abb. 1 e, rote Sternchen). ER blieb unverändert bei 10 8 CFU/g, wohingegen kein Individuum die Verpuppung bei 10 9 CFU/g auf DELFIN erreichteB und sehr wenige Individuen erreichten das Erwachsenenstadium auf Scutello DF , wobei DT um mehr als 2 Tage erhöht wurde (Abb. 1 c, d; Tabelle 1 ). Für beide Formulierungen wurde keine signifikante Verzerrung der SR beobachtet (Ergänzende Informationen S2 ).

Die Btk- Formulierung wirkt sich stark auf das Überleben während der Larvenstadien aus
Die kumulative Exposition gegenüber DELFIN A vom Ei bis in die späten Stadien des 1. und 2. Stadiums hatte keinen Einfluss auf das Überleben der Larven bei 10 7 KBE/g, reduzierte es jedoch für beide Larven im Larvenstadium oberhalb dieser Dosis, um bis zu 37 % Sterblichkeit bei 10 9 KBE /g zu erreichen. g (Abb. 2 a). Eine verringerte Überlebensrate trat tendenziell bei einer niedrigeren Dosis auf, wenn die kumulative Überlebensrate später in der Entwicklung gemessen wurde, dh 10 9 CFU/g für Larven im späten 1. Larvenstadium und 10 8 CFU/g für Larven im späten 2. Larvenstadium (Abb. 2a ; Tabelle 1 ) . . Bei beiden Stadien überleben Larven bei 10 9 CFU/g waren merklich kleiner und weniger aktiv als diejenigen, die bei niedrigeren Dosen überlebten, und keines dieser Individuen erreichte das Puppenstadium (siehe Ergebnisse oben). Eine 24-stündige Exposition der Larven im 1. oder 2. Larvenstadium führte bei 10 9 CFU/g zu einer 36%igen Abnahme des Überlebens der Larven im 1. Larvenstadium, während das Überleben der Larven im 2. Larvenstadium unverändert blieb ( 2b , Tabelle 1 ).

Figur 2
Figur 2
Überleben von D. melanogaster Canton S-Larvenstadien bei zunehmenden Dosen von Btk DELFIN A. ( a ) Anteil der überlebenden Larven (Mittelwert ± Sem) nach Exposition gegenüber der Btk -Formulierung vom Ei bis zum späten 1. Stadium (offene Lutschtabletten) und zum späten 2. Stadium (schwarz Dreiecke). ( b ) Anteil der überlebenden Larven (Mittelwert ± Standardabweichung) nach 24- stündiger Btk - Formulierungs-Exposition von Larven im frühen 1. Larvenstadium (offene Rauten) und Larven im 2. Larvenstadium (schwarze Dreiecke). N  = 5–7 Wiederholungen von 20 Personen pro Dosis. Ergebnisse von Post-hoc-Vergleichen jeder Dosis mit der Kontrolle: *0,01 <  P  < 0,05; **0,001 <  P  < 0,01; *** P < 0,001.

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Die entwicklungsbedingte Exposition gegenüber der Btk -Formulierung beeinflusst die fitnessbezogenen Merkmale bei Erwachsenen nicht stark
Trotz einer großen Variation zwischen den beiden unabhängigen Sätzen von Versuchsreplikaten (Tabelle 1 ) war die Lebensdauer von Erwachsenen, die mit 5 × 10 6 CFU/g DELFIN A in proteinarmem/zuckerreichem Medium aufgezogen wurden, ähnlich der von nicht-exponierten Tieren Bedienelemente (Abb. 3 ). Männchen und Weibchen, die sich mit den beiden höchsten Dosen entwickelten, zeigten einen mäßigen Langlebigkeitsvorteil, höher bei Weibchen für 10 8 CFU/g ( 3a , b, d, e; Tabelle 1 ). Männchen überlebten im Allgemeinen besser als Weibchen (Tabelle 1 ), aber ihr Langlebigkeitsvorteil der Entwicklung mit 10 8 CFU/g wurde nur in einem Experiment beobachtet ( 3b , e).

Figur 3
Figur 3
Fitnessbezogene Merkmale von Erwachsenen (Langlebigkeit und Gesamtzahl der Nachkommen) nach der Entwicklung auf Btk DELFIN A. ( a , d ) weibliche Langlebigkeit (mittlerer Überlebensanteil über die Zeit ± sem), ( b , e ) männliche Langlebigkeit (Mittelwert ± sem), und ( c , f ) Gesamtzahl der Nachkommen (Mittelwert ± SEM), gemessen an Individuen, die sich ohne Btk- Formulierung entwickelt haben (blaue Elemente) und an 5 × 10 6 CFU/g Btk DELFIN A (grüne Elemente), 5 × 10 7 CFU /g (rote Gegenstände) und 10 8 CFU/g (dunkelrote Gegenstände). Daten aus 2 Experimenten ( a –c , Versuch 1; d – f , Versuch 2). Für jedes Merkmal, N  = 3–5 Wiederholungen von 15 Männchen und 15 Weibchen pro Dosis in Versuch 1, N  = 3 Wiederholungen von 15 Männchen und 15 Weibchen in Versuch 2. Ergebnisse von Post-hoc-Vergleichen jeder Dosis mit der Kontrolle: *0,01 <  P  < 0,05; **0,001 <  P  < 0,01; *** P  < 0,001.

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Die Anzahl der Nachkommen, die von den 15 Weibchen jeder Fliegengruppe während des Langlebigkeitsexperiments produziert wurden, variierte in Abhängigkeit sowohl vom Experiment als auch von der DELFIN A-Dosis (Tabelle 1 ). Im 1. Experiment hatten Erwachsene von Larven, die mit 10 8 KBE/g aufgezogen wurden, weniger Nachkommen im Vergleich zu den Kontrollen und zu Erwachsenen, die sich unter den anderen Dosen entwickelten, während die Gesamtzahl der Nachkommen unabhängig von der DELFIN A-Dosis im 2. Experiment variierte (Abb. 3 c,f, Tabelle 1 ).

Entwicklungsveränderungen in Abhängigkeit von der Dosis der Btk- Formulierung sind nicht spezifisch für D. melanogaster Canton S
Wie bei D. melanogaster Canton S wurde die Entwicklung von drei anderen D. melanogaster -Stämmen (Wildtyp Nasrallah und Sefra und Doppelmutante YW1118) bei Dosen von bis zu 10 7 KBE/g DELFIN A in einem proteinreichen Produkt nicht beeinträchtigt /Zuckerfreies Medium. Im Gegensatz dazu war das ER jedes Stamms bei höheren Dosen stark reduziert und DT erhöht (Abb. 4 a, b, Tabelle 1 ), wobei kein Individuum das Puppenstadium bei 10 9 CFU/g (LD50 zwischen 10 8 und 10 ) erreichte 9 KBE/g). Bei 10 8 CFU/g war das Ausmaß der Auswirkungen auf Canton-S-Fliegen geringer als das, das auf dem proteinarmen/zuckerreichen Medium beobachtet wurde (siehe Abb. 1 a, b). Bei dieser Dosis variierte das ER zwischen den Stämmen, wobei die größte Verringerung bei Sefra beobachtet wurde (Tabelle 1 ). Wir beobachteten keine dosisabhängige Verzerrung bei SR (Ergänzende Informationen S3 ).

Figur 4
Figur 4
Entwicklung von vier D. melanogaster - Stämmen bei steigenden Dosen von Btk DELFIN A. ( a ) Emergenzrate und ( b ) Entwicklungszeit (Mittelwert ± SEM) der Stämme Canton S (blaue Rauten), Nasrallah (gelbe Dreiecke), Sefra (grün Quadrate) und YW1118 (rote Kreise). N  = 4 Gruppen von 50 Eiern pro Dosis und Fliegenstamm für jedes Merkmal. Ergebnisse von Post-hoc-Vergleichen jeder Dosis mit der Kontrolle: **0,001 <  P  < 0,01; *** P  < 0,001.

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Die Btk- Formulierung wirkt sich unterschiedlich auf andere Drosophila- Arten aus
Bei sieben anderen Drosophila -Arten aus verschiedenen phylogenetischen Kladen, die gemeinsam im Feld vorkommen 48 , 49 , 50 , 51 , hatten Dosen von bis zu 10 6 KBE/g DELFIN A in einem proteinreichen/zuckerfreien Medium keine Wirkung auf ER und DT, wohingegen alle Individuen das Puppenstadium bei 10 9 CFU/g nicht erreichten ( 5 , 6 ). Die Amplitude der Entwicklungsveränderungen bei 10 7 und 10 8 CFU/g variierte zwischen den Arten ( 5 , 6 ; Tabelle 1 ). Alle Arten waren um 10 8 betroffen CFU/g wie D. melanogaster (siehe Abb. 4a zum Vergleich). D. simulans und D. busckii hatten unveränderte ER, aber DT war leicht erhöht für D. simulans (obwohl leicht verringert bei 10 7 KBE/g; ähnliche Ergebnisse mit einem japanischen Stamm, Daten nicht gezeigt) und stark erhöht für D. busckii ( um 20 %, dh ~ 4 Tage) (Abb. 5 , 6 , Tabelle 1 ). D. yakuba ER und DT waren denen von D. melanogaster ähnlich , mit einer LD50 von etwa 10 8 CFU/g und einem moderaten DT-Anstieg von ~ 1 Tag (Abb. 5 ,6 , Tabelle 1 ; ähnliche Ergebnisse mit einem Stamm aus Schweden, Daten nicht gezeigt). Das ER von D. hydei und D. subobscura war mit 10 8 CFU/g (LD50 unterhalb dieser Dosis) sehr niedrig, mit einem hohen DT ( 5 , 6 ; Tabelle 1 ), während D. immigrans nicht überlebte. Bei 10 8 CFU/g trat kein D. suzukii- Individuum auf, und die Entwicklung war bereits bei 10 7 CFU/g moderat beeinträchtigt ( 5 , 6 ). Für beide Arten wurde keine dosisabhängige Verzerrung der SR festgestellt (Ergänzende Informationen S5 ).

Abbildung 5
Abbildung 5
Auflaufrate von sieben Drosophila - Arten bei steigenden Dosen von Btk DELFIN A. Mittlere Auflaufrate (± sem). N  = 4 Replikate mit 50 Eiern pro Dosis für D. simulans , D. yakuba , D. subobscura und D. busckii , N  = 4 Replikate mit 30 Eiern pro Dosis für D. hydei , D. suzukii und D. immigrans . Ergebnisse von Post-hoc-Vergleichen jeder Dosis mit der Kontrolle: • 0,05 <  P  < 0,1; *** P  < 0,001.

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Abbildung 6
Abbildung 6
Entwicklungszeit von sieben Drosophila- Arten bei steigenden Dosen von Btk DELFIN A. Mittlere Entwicklungszeit (± sem). N  = 4 Replikate mit 50 Eiern pro Dosis für D. simulans , D. yakuba , D. subobscura und D. busckii , N  = 4 Replikate mit 30 Eiern pro Dosis für D. hydei , D. suzukii und D. immigrans . Ergebnisse von Post-hoc-Vergleichen jeder Dosis mit der Kontrolle: *0,01 <  P  < 0,05; **0,001 <  P  < 0,01; *** P  < 0,001.

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Entwicklungsänderungen können aus einer Synergie zwischen Formulierungskomponenten resultieren
Da einige Zusatzstoffe kommerzieller Formulierungen zu den beobachteten Wirkungen beitragen könnten, wurde eine DELFIN A-Suspension dialysiert, um Zusatzstoffe mit niedrigem Molekulargewicht zu entfernen, resuspendiert und mit Fliegenmedium mit niedrigem Protein-/hohem Zuckergehalt gemischt. Bei 10 7 CFU/g beeinflusste die Suspension ER und DT nicht, während sich bei 10 9 CFU/g kein Individuum verpuppte ( 7a ; Tabelle 1 ). Bei 10 8 CFU/g war ER nicht modifiziert, aber DT stieg in einem Versuchssatz um ~ 1 Tag an, was teilweise die ohne Dialyse beobachteten Veränderungen reproduzierte (Abb. 7 a, b; siehe auch Abb. 1 a, b, Tabelle 1 ; 3 unabhängige Experimente für ER, 2 unabhängige Experimente für DT).

Abbildung 7
Abbildung 7
Bewertung der Rolle von niedermolekularen Komponenten von Btk DELFIN A (Dialyse; Membran-Cutoff: 8–10 kDa) in der veränderten Entwicklung von D. melanogaster Canton S. ( a ) Emergenzrate und ( b ) Entwicklungszeit (Mittelwert ± sem) bei steigenden Dosen von dialysiertem DELFIN A. N  = 3 Experimente mit 4 Replikaten mit 20 Eiern pro Dosis für die Schlupfrate, N  = 2 Experimente mit 4 Replikaten pro Dosis für die Entwicklungszeit. Ergebnisse von Post-hoc-Vergleichen jeder Dosis mit der Kontrolle: *** P  < 0,001. ( c) Anti-Cry1A-Sonden-Immunoblot von nicht-dialysierten (ND) und dialysierten (D) Suspensionen, der die Abnahme der Menge an ~ 130/140 kDa migrierenden Protoxinen und die Zunahme der potentiell aktivierten ~ 60/70 kDa-Toxine nach der Dialyse zeigt .

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Die Cry1A-Profile von DELFIN A-Suspensionen (dialysiert oder nicht) enthielten eine Bande für die 130-kDa-Protoxine und eine Bande bei 60–70 kDa, die wahrscheinlich die aktivierten Toxine darstellen, aber auch kleinere Fragmente, die aus dem Abbau von Cry1A resultieren (Abb 7c ) . Wir untersuchten ferner die jeweiligen Rollen von Btk- Toxinfragmenten und Sporen bei den Veränderungen der Entwicklung von D. melanogaster durch Dialyseexperimente, gefolgt von aufeinanderfolgenden Zentrifugationen, um die meisten Sporen und Toxinkristalle zu entfernen. Trotz Variation zwischen den Experimenten wurde ER nur in einem der drei Experimente stark beeinflusst, während DT in Gegenwart von zentrifugierten Überständen immer signifikant erhöht war (Ergänzende Informationen S6). Bemerkenswerterweise wurde die Entwicklung von D. melanogaster in Gegenwart einer Eigenproduktion des Btk -Stammes 4D1, der Sporen, Toxine, aber keine Zusatzstoffe enthielt, selbst bei der höchsten Dosis nicht beeinträchtigt (Ergänzungsinformation S7 ).

Diskussion
Unsere Studie testete die Nebenwirkungen der Einnahme von kommerziellen Formulierungen von Bt - Bioinsektiziden (hauptsächlich hergestellt aus Bt-Kurstaki- Stämmen ( Btk ), aber auch aus Bt-Israelensis ( Bti )) während der Entwicklung von acht Nichtzielarten von Drosophila , die natürlicherweise in behandelten Gebieten vorkommen. Obwohl die empfohlenen Dosen für eine Feldspritze mit einer Formulierung keinen Einfluss auf die Entwicklung von Drosophila hatten, führten die 10- und 50-fach höheren Dosierungen zu deutlicher Mortalität und/oder Entwicklungsverzögerung bei mindestens zwei der getesteten Arten. Wir können aus unseren Daten extrapolieren, dass diese Dosen sechs der acht getesteten Arten und die vier Stämme von D. melanogaster beeinflussen können. Die Entwicklungsveränderungen waren bereits bei diesen Dosen stark, was auf ein Auftreten bei niedrigeren eingenommenen Dosen hindeutet, aber in unserem Versuchsaufbau nicht sichtbar war. Außerdem könnte unter unseren experimentellen Bedingungen eine einzelne Drosophila -Larve während ihrer Entwicklung wahrscheinlich nicht 1 g Medium verarbeiten. Weitere Analysen, möglicherweise auf molekularer Ebene, wären erforderlich, um die minimale Dosis zu bestimmen, die auf die Fliegenlarve wirkt. Darüber hinaus waren alle getesteten Arten außer D. simulans bei einer 100-fachen Feldsprühdosis stark betroffen, und bei der höchsten getesteten Dosis, die dem 1000-fachen der maximalen Felddosis entspricht, aber weit unter der akuten Vergiftung liegt, trat keine oder nur eine sehr begrenzte Fliegenentwicklung auf Dosen, die klassischerweise in zahlreichen Studien verwendet wurden 5. Die empfohlenen Dosen für jedes Sprühen der stabilisierten Formulierung werden für einen homogenen und trockenen Bereich ohne Überlappung angegeben. Auf dem Feld können empfohlene wiederholte Sprühungen und Regenauswaschungen nach dem Sprühen die Konzentration von Bt - Sporen und -Toxinen sowohl räumlich als auch zeitlich erhöhen. Während eine 1000-fache Dosis der Empfehlungen im Feld kaum erreicht werden würde, könnten die minimalen Dosen erreicht werden, bei denen die Entwicklung der Fliege beeinflusst wird und die niedrigeren Dosen, ab denen Entwicklungsveränderungen auftreten. Unsere Daten identifizierten auch ein erstes Entwicklungsfenster der Empfindlichkeit gegenüber der Btk - Formulierung während des ersten Larvenstadiums, was hauptsächlich die Nebenwirkungen erklärt, während ein zweites Mortalitätsereignis in der Verpuppungszeit aufzutreten schien.

Beim Testen auf generische Nebenwirkungen von Bt - Formulierungen beobachteten wir ähnliche Muster von Entwicklungsveränderungen bei D. melanogaster , jedoch nur bei höheren Dosen mit zwei anderen Btk - Formulierungen und einer Bti -Formulierung (das 1000- bis 2000-fache der empfohlenen Sprühdosis). Die drei Btk- Formulierungen, die auf zwei verschiedenen Bakterienstämmen basieren, haben ähnliche Profile von Cry1A-Protoxinen und aktivierten Toxinen, unterscheiden sich jedoch in ihrem effizienten Sporengehalt. Somit können die Art der Formulierung und wahrscheinlich die Zusatzstoffe die beobachtete Variation in der Dosiswirkung erklären.

Die Auswirkungen von Btk- Formulierungen auf die Entwicklung von D. melanogaster stimmen mit zunehmenden Beweisen überein, die auf ein teilweises spezifisches Targeting von Bt hindeuten 12 , 26 , 27 die spezifische Bindung von proteolysierten Bt -Toxinen an Epithelzellrezeptoren des Mitteldarms, wodurch Ziele für jede Bt - Unterart definiert werden 12 , 15 , 17. Mehrere primäre und sekundäre Arten von Toxinrezeptoren wurden in Lepidoptera- und Diptera-Mücken identifiziert, wie z. B. Cadherin-ähnliche Proteine, Aminopeptidasen, GPI-verankerte alkalische Phosphatasen 8 und in jüngerer Zeit der ATP-abhängige Bindungskassetten-Reporter C2 52 . In Drosophila 52 wurden keine Orthologe der Cadherin-ähnlichen Cry-Rezeptoren von Lepidoptera gefunden , was die Idee der fehlenden Wirkung von Btk - Toxinen auf diese Fliegen stützt. Doch, DrosophilaFliegen können andere Arten von Cry-Rezeptoren haben, was die beobachteten Auswirkungen auf die Entwicklung erklärt, aber dies muss noch untersucht werden. Darüber hinaus würde der mögliche Mangel an Solubilisierung der Protoxinkristalle und an proteolytischer Aktivierung von Toxinen durch Proteasen im Fliegendarm, die beide für die Cry-Aktivität in Insektenlarven 15 erforderlich sind, möglicherweise durch die erheblichen Mengen an aktiven Cry1A-Toxinfragmenten darin kompensiert Btk- Formulierungen. Andere Btk -synthetisierte Toxine, die in den Formulierungen vorhanden sind, könnten ebenfalls an der beobachteten Cross-Order-Aktivität beteiligt sein, da einige, wie Cry2A, eine insektizide Wirkung sowohl auf Lepidoptera als auch auf Diptera haben 53 .

Da die Einnahme von Bacillus subtilis oder Btk Cry-free die Entwicklung von D. melanogaster nicht beeinträchtigt , können die beobachteten Entwicklungsveränderungen nicht allein auf eine schwerwiegende Störung der Verdauung und der Nährstoffaufnahme/-konkurrenz aufgrund des Vorhandenseins hoher Mengen an Sporen/Bakterien zurückzuführen sein den Larvendarm während der gesamten Entwicklung. Dies deutet auf eine synergistische Wirkung von Btk - Sporen und Cry-Toxinen hin, die mit den Bt -Wirkungsmodellen auf Insektenlarven übereinstimmt, dh der Bruch des Darmepithels, der die Besiedlung der Hämocoele durch Darmbakterien, einschließlich Bt- Sporen , ermöglicht 15 , 17 , 18. Auch die partielle Nachahmung von Sterblichkeitsraten und Entwicklungsverzögerungen in vorläufigen Dialysetests würde einen Beitrag diffusionsfähiger niedermolekularer Verbindungen in Btk - Formulierungen (z. B. Rückstände von Nährmedien, Salzen, Zusatzstoffen) zu diesen Entwicklungsveränderungen unterstützen. Weiterhin wird die Entwicklung von D. melanogaster durch die Einnahme von selbstgemachten Sporen und Cry-Toxinen des ohne Zusatzstoffe verwendeten Btk -Stammes 4D1 auch in der höchsten Dosis (oder HD1, ein Referenzstamm, der auch als Kontrolle verwendet wird) nicht beeinflusst. Im Gegensatz zu kommerziellen Btk- Formulierungen enthält BtkDie 4D1-Kultur enthält wenige aktivierte Cry-Toxine und kleinere Toxinfragmente, was den möglichen Beitrag solcher Fragmente zur ordnungsübergreifenden Aktivität von Btk - Formulierungen auf Drosophila befürwortet . Der Abschluss dieser Vorversuche ist erforderlich, um die Mechanismen der schädlichen Wirkungen von Btk - Formulierungen auf die Entwicklung von Drosophila weiter zu untersuchen und die jeweiligen Rollen der synergistischen Sporen/Toxine/Kristalle und von Formulierungszusätzen aufzuklären.

Wie für D. suzukii berichtet, das Btk- Kulturen ausgesetzt war 45 , trat die Mortalität von D. melanogaster bei der Btk- Formulierung hauptsächlich während der frühen Entwicklung auf. Nur etwa 40 % der Larven im 1. und 2. Larvenstadium starben bei der höchsten getesteten Dosis ( 2 ), während kein Individuum das Puppenstadium erreichte, wobei die verbleibende Sterblichkeit wahrscheinlich während oder am Ende des 3. Larvenstadiums auftritt, was möglicherweise darauf zurückzuführen ist auf die verzögerte Wirkung der im Darm angesammelten Btk - Sporen und -Toxine zu Beginn der Verpuppung. Interessanterweise ahmten Entwicklungsveränderungen (Mortalität, verzögertes Auflaufen) diejenigen nach, die typischerweise durch Ernährungsstress bei Insektenlarven verursacht werden 54, 55 . Dementsprechend wurden die Entwicklungsveränderungen teilweise auf einem proteinreichen Fliegenmedium gerettet, wahrscheinlich durch eine kompensatorische Proteinaufnahme, wie bei anderen Arthropodenarten 55 , 56 , 57 . Auch war das Geschlechterverhältnis der Fliegen nach der Entwicklung mit der Btk -Formulierungsdosis, die das Auflaufen der Fliegen beeinflusste, und unter Proteinrestriktion stark zugunsten der Männchen verzerrt. Dies unterstreicht die Bedeutung von Ernährungsbedingungen wie Proteinrestriktion, die zu geschlechtsspezifischen Unterschieden in der Anfälligkeit der Larven für Umweltstressoren hinzukommen, hier die Akkumulation der Btk - Formulierung, wie bereits zuvor bei D. melanogaster berichtet wurde 58 .

Die Entwicklung bei subletalen Dosen der Btk- Formulierung hatte keinen dramatischen Einfluss auf die Langlebigkeit von D. melanogaster- Erwachsenen oder ihre lebenslange Nachkommenzahl. Die Exposition gegenüber Dosen der Btk -Formulierung während der Entwicklung, die die Wahrscheinlichkeit, das Erwachsenenstadium zu erreichen, leicht und stark verringerte, bot den überlebenden Fliegen sogar einen dosisabhängigen Langlebigkeitsvorteil und führte tendenziell zu einer Erhöhung der Anzahl ihrer Nachkommen. Die Exposition gegenüber der Btk- Formulierung während der gesamten Entwicklung selektierte wahrscheinlich resistente und/oder tolerante Individuen, was an die erhöhte Langlebigkeit erwachsener Insekten erinnert, die während der Entwicklung einen Ernährungsstress überstanden haben 59 , 60 oder Umweltstressoren standgehalten haben 61.

Der Ursprung von Drosophila (Art, Population/Stamm) beeinflusste die Amplitude der durch die Btk- Formulierung induzierten Entwicklungsänderungen. Für D. melanogaster waren alle getesteten Stämme gleich anfällig, jedoch mit Variationen in den Dosis-Wirkungs-Amplituden. Diese Unterschiede in der Anfälligkeit legen eine mögliche räumliche und zeitliche Heterogenität der potenziellen Auswirkungen des Btk -Spritzens auf natürliche D. melanogaster - Populationen nahe. Bei den anderen sieben getesteten Arten traten unabhängig von ihrer phylogenetischen Entfernung Unterschiede in der Anfälligkeit für die Btk- Formulierung hinsichtlich der Art der Entwicklungsänderungen und Wirkungsamplituden auf. Für die UntergattungDrosophila , D. simulans war weniger empfindlich als seine Schwesterart D. melanogaster , während die afrikanische D. yakuba ähnliche Auswirkungen auf die Entwicklung erfuhr wie D. melanogaster . Obwohl phylogenetisch ähnlich, würden D. melanogaster und D. simulans sehr unterschiedlich auf Btk- Formulierungen reagieren, mit einem möglichen Vorteil für D. simulans im Falle einer Konkurrenz. D. immigrans , D. subobscura und D. hydei waren ähnlich empfindlicher als D. melanogaster . Die phylogenetisch entfernte D. busckii(Untergattung Dorsilopha ) war von allen Arten in Bezug auf die Entwicklungssterblichkeit am wenigsten betroffen, aber seine Entwicklung war stark verzögert. Die Arten D. melanogaster , D. simulans , D. hydei , D. immigrans und D. busckii gehören zur Gilde der kosmopolitischen heimischen Drosophila - Arten, D. subobscura ist eine subkosmopolitische Art und D. busckii ist ein opportunistischer Fruchtfresser Arten 62 , 63 , 64. Sie alle koexistieren häufig und konkurrieren auf den gleichen diskreten und kurzlebigen verrottenden Fruchtflecken, mit saisonalen Schwankungen in der Zusammensetzung der Fliegengemeinschaft 47 , 48 , 49 , 62 . Unterschiede in der Artenanfälligkeit gegenüber Btk- Formulierungen könnten die Bedingungen der Larvenkonkurrenz verändern und daher lokale und zeitliche Variationen in der Zusammensetzung von Drosophila- Gemeinschaften hinzufügen. Die potenziellen Nebenwirkungen von Bt - Sprays auf Nichtzielgemeinschaften von Drosophila wären kaum vorhersehbar, da sie von räumlichen Mustern der Bt - Ansammlung abhängen würden. Eine formelle Mesokosmos-Studie von DrosophilaGemeinschaftsdynamiken unter Exposition gegenüber der Btk -Formulierung, zumindest unter Halbfeldbedingungen, würden dazu beitragen, die Folgen der Bt - Akkumulation auf die Artenkonkurrenz und die Zusammensetzung der Gemeinschaft zu identifizieren. Die Exposition gegenüber der Btk- Formulierung wirkte sich auch auf die Entwicklung der invasiven D. suzukii aus, wie kürzlich berichtet wurde 45 , wobei diese Spezies am anfälligsten ist, mit Wirkungen, die bereits bei nur dem 10-Fachen der empfohlenen Sprühdosis deutlich nachweisbar sind . Im Vergleich zu den anderen getesteten Arten, die auf faulen Früchten leben, bedroht D. suzukii die Obstproduktion, da es sich in gesunden reifenden Beerenfrüchten ernährt und Eier legt 63 , 64 ,65 , die früher während der Obstsaison Obstgärten und Weinberge besiedelt. Die höhere Anfälligkeit von D. suzukii für die Akkumulation der Btk -Formulierung in der Umwelt könnte die mögliche ökologische Belastung durch seine Invasion für lokale Gemeinschaften von fruchtfressenden Drosophila in Obstplantagen verringern. Da D. suzukii -Angriffe auf Früchte ihre Zersetzung beschleunigen können, kann die erhöhte Anfälligkeit alternativ die Anzahl der Früchte verringern, die für die verrottenden fruchtfressenden Drosophila - Arten verfügbar sind.

Insgesamt zeigen unsere Daten, dass die Einnahme von Btk -Bioinsektiziden über den empfohlenen Sprühdosen potenziell Auswirkungen auf Nichtziel- Drosophila - Fliegen haben kann, wobei die Wirkungsamplitude sowohl von der Formulierung als auch von der Fliegenart abhängt. Obwohl unsere Studie unter kontrollierten Laborbedingungen durchgeführt wurde, die sich erheblich von denen im Freiland unterscheiden können (z. B. Temperatur, pH-Wert, Feuchtigkeit, Nahrungsverfügbarkeit, Vorhandensein von Fressfeinden/Parasiten/Krankheitserregern usw.), wurden Standardlaborstämme und -fliegen abgeleitet aus kürzlich gesammelten Populationen zeigten ähnliche Muster von Entwicklungsveränderungen, was darauf hindeutet, dass unsere Ergebnisse wahrscheinlich verallgemeinerbar sind. Jüngste Studien haben ähnliche nachteilige Nebenwirkungen aufgrund des wiederholten Versprühens des Bti berichtetFormulierung auf Nichtzielorganismen 25 und indirekt auf Raubtiere über Nahrungsnetze 66 . Aus diesen Studien und unseren Daten hier geht klar hervor, dass bei der Verwendung von Bt -Bioinsektiziden darauf geachtet werden sollte , potenzielle Nebenwirkungen auf Nichtzielorganismen und damit auf die Biodiversität zu vermeiden oder zumindest zu minimieren. Endlich könnte D. melanogaster als Modellspezies dienen, um die diesen Nebenwirkungen zugrunde liegenden Mechanismen und/oder das mögliche Auftreten von Resistenzen gegen diese Bioinsektizide zu identifizieren.

Methoden
Kommerzielle Formulierungen, Bacillus -Produktionen und Colony Forming Unit
Btk - Marken (Serotyp 3a, b, c 67 ) waren DELFIN (zwei Formulierungen namens A und B; Stamm SA-11; benetzbare Granulate, Valent BioSciences, AMM 9200482, 32.000 UI/mg) und Scutello DF (eine Untermarke von Dipel; Stamm ABTS-351; benetzbares Granulat, Biobest, AMM 2010513, 540 g/kg). Bti -Marke (Stamm HD-14; Serotyp 14 67 ) war VectoBac WG (benetzbares Granulat, Bayer, AMM 2020029, 3000 UTI/mg). Für jede Formulierung wurde die Anzahl der lebensfähigen Sporen durch Zählen der koloniebildenden Einheiten (KBE) geschätzt, die sich auf LB-Agar nach Inkubation über Nacht bei 30 °C aus Reihenverdünnungen einer Suspension (koloniebildende Einheiten (KBE) pro mg Produkt) entwickelten. Schätzungen waren 5 × 10 7 CFU/mg für DELFIN A; 2,5 × 10 7 CFU/mg für DELFIN B; 2,2 × 10 7 KBE/mg für Scutello DF ; 6 × 10 7 CFU/mg für VectoBac WG und waren während des Zeitrahmens der Experimente stabil. Unsere CFU-Schätzungen stimmen mit denen überein, die für die Formulierungen zwischen 1–5 × 10 13 CFU/kg angegeben sind. Die vom Hersteller empfohlene DELFIN - Dosierung für eine Spritzung liegt je nach Kultur zwischen 0,15 und 1,5 kg/ha. Basierend auf unseren CFU-Schätzungen entspricht dies 7,5 × 10 4 bis 7,5 × 10 5 CFU/cm 2 von DELFIN A und 3,75 × 10 4bis 3,75 × 10 5 CFU/cm 2 von DELFIN B. Scutello DF wird mit 0,1 bis 1 kg/ha verwendet, was 2,2 × 10 4 bis 2,2 × 10 5 CFU/cm 2 entspricht . VectoBac WG wird mit 0,125 bis 1 kg/ha verwendet, was 7,5 × 10 4 bis 6 × 10 5 KBE/cm 2 entspricht .

Der akristallfähige Btk 4D22-Stamm (depletiert für das Cry-Toxin-kodierende Plasmide 68 ; Bacillus Genetic Stock Center, https://bgsc.org , Columbus, USA) und ein Drosophila -nicht-pathogener Bacillus subtilis (von Dr. E. Bremer, Universität Marburg, Deutschland) wurden bei 30 °C im sporulationsspezifischen Medium (Bactopepton 7,5 g, KH 2 PO 4 3,4 g, K 2 HPO 4 4,35 g, Glucose 7,5 g, PGSM-Salze (MgSO 4 ·7H 2 O , MnSO 4 ·H 2 O, ZnSO 4 ·7H 2 O, FeSO 4 ·7H2 O) 5 ml, CaCl 2 0,25 M, destilliertes Wasser qsp 1 l, pH 7,2) bis zur Sporulation (etwa 14 Tage). Vegetative Zellen wurden eliminiert (1 h bei 70 °C) und nach Zentrifugation (4500 U/min, 20 min, 4 °C) wurde ein Sporenpellet gesammelt, mit sterilem Wasser gewaschen und lyophilisiert. Produktions-CFUs wurden wie oben beschrieben geschätzt.

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Drosophila melanogaster -Stämme (phylogenetische Untergruppe: melanogaster) waren der Wildtyp Canton S (Bloomington Drosophila Centre), der als Referenzstamm verwendet wurde, „Nasrallah“ aus Tunesien (Stamm 1333, Gif-sur-Yvette), ein französischer Freilandstamm „Sefra “ (Südfrankreich, 2013) und der doppelt mutierte Standardstamm YW1118 (weiße und gelbe Mutationen; Geschenk von Dr. B. Charroux, IBD, Marseille-Luminy). Andere Drosophila - Arten waren D. simulans (Gif-Stamm 1132; phylogenetische Untergruppe: melanogaster), D. yakuba (Gif-Stamm 1880; phylogenetische Untergruppe: melanogaster), D. hydei (phylogenetische Untergruppe: hydei) und die invasive D. suzukii(phylogenetische Untergruppe: immigrans) (beide freundlicherweise zur Verfügung gestellt von Dr. R. Allemand, LBBE, Universität Lyon 1), D. immigrans (phylogenetische Untergruppe: immigrans), D. subobscura (phylogenetische Untergruppe: obscura) und D. busckii ( Dorsilopha Untergattung). Die Populationen der letzten drei Arten wurden von Individuen initiiert, die im Frühjahr 2015 im Südosten Frankreichs gesammelt wurden.

Alle Fliegen wurden bei kontrollierter Dichte (150–200 Eier/40 ml Fliegenmedium) unter Standardlaborbedingungen (25 °C oder 20 °C für kürzlich gesammelte Arten, 60 % relative Luftfeuchtigkeit, 12:12 Hell/Dunkel-Zyklus) gehalten ), auf einem proteinreichen/zuckerfreien Fliegenmedium (10 % Maismehl, 10 % Hefe, 0 % Zucker). In unserem Labor wurde D. melanogaster Canton S auch auf einem Standardmedium mit niedrigem Proteingehalt und hohem Zuckergehalt (8 % Maismehl, 2 % Hefe, 2,5 % Zucker) gezüchtet. Für jedes Experiment wurden Eier, Larven und Fliegen unter Standardbedingungen gehalten.

Allgemeine Intoxikationsmethode und Dosis-Wirkungs-Assay
Für die Dosis-Wirkungs-Assays wurden Formulierungen und Sporenproduktionen seriell in Puffer verdünnt, und 100 ul jeder Verdünnung wurden gründlich mit 1 g Fliegenmedium (100 ul/g-Dosen) homogenisiert. Eier und definierte Larvenstadien wurden aus Vorratsfläschchen gesammelt und wie unten beschrieben in die Intoxikationsfläschchen und Schalen überführt. Die Aufzucht erfolgte dann bis zum Schlupf der Fliege, bei Larvenanfälligkeitstests bis zum Erreichen des gewünschten Entwicklungsstadiums bzw. 24 h für Frühlarven des 1. und 2. Larvenstadiums. Äquivalente Kontrollgruppen wurden auf Fliegenmedium übertragen, das nur mit dem gleichen Puffervolumen homogenisiert war.

Entwicklungsbezogene Merkmale und Larvenüberleben
Entwicklungsmerkmale nach Intoxikation während der gesamten Entwicklung der D. melanogaster - Stämme und der anderen Drosophila -Arten wurden an einer genauen Anzahl lebensfähiger Eier bewertet, die aus der Masseneiablage gesammelt und in Intoxikationsfläschchen mit Fliegenmedium (mit hohem Zuckergehalt/niedrigem Proteingehalt oder hohem Proteingehalt/ zuckerfrei wie angegeben) gemischt mit Formulierungen oder Sporenproduktionen in Dosierungen von 1 × 10 5 oder 5 × 10 5 KBE/g (Mittelwert entspricht den Herstellerempfehlungen; Zusatzinformation S1 ) bis 10 9 KBE/g. Die Eier wurden bis zum Schlüpfen der Fliege sich entwickeln gelassen. Die Eidichte wurde auf 8–10 Eier/g Medium eingestellt (10 Eier/g auf 2 g Medium in kleinen Fläschchen Ø 3,3 cm, Oberfläche ~ 8,5 cm2 , 0,24 g/cm 2 für Tests an D. melanogaster Canton S; 8 Eier/g auf 6 g Medium in großen Fläschchen Ø 4,6 cm, Oberfläche ~ 16 cm 2 , 0,37 g/cm 2 für Stämme und Artenvergleiche), außer D. hydei , D. suzukii und D. immigransbei denen die Eidichte aufgrund ihrer Fortpflanzungsbiologie um die Hälfte reduziert war (5 Eier/g auf 6 g). Anzahl und Geschlecht der schlüpfenden Fliegen wurden einmal täglich bis zu dem Tag aufgezeichnet, an dem sich die ersten Puppen der nächsten Generation bilden. Die Schlupfrate (Anteil der aus den ersten Eiern geschlüpften Fliegen), die Entwicklungszeit (mittlere Anzahl von Tagen bis zum Abschluss der Entwicklung) und das Geschlechterverhältnis (Anteil männlicher Fliegen) wurden für jedes Wiederholungsfläschchen berechnet.

Für die Larven-Empfindlichkeitstests wurde das Überleben an 20 Eiern/Larven von D. melanogaster Canton S in einem geeigneten Stadium gemessen, die aus einer 4-stündigen Masseneiablage gesammelt und in kleine Schalen (Ø 3 cm, Oberfläche ~ 7 cm 2 ) mit 1 übertragen wurden g proteinreiches/zuckerfreies Fliegenmedium (weniger einschränkend für die frühe Larvenentwicklung), homogenisiert mit DELFIN A-Dosen im Bereich von 10 5 CFU/g bis 10 9 CFU/g. Larven im ersten und zweiten Stadium wurden verwendet, da das Wachstum während dieser beiden Stadien 39 , 69 exponentiell istund Larven sind dem Bioinsektizid eher stark ausgesetzt. Der Anteil der überlebenden Larven wurde im angegebenen Entwicklungsstadium für den kumulativen Überlebenstest oder 24 Stunden später gemessen. Für das kumulative Überleben wurden nicht ausgebrütete Eier aus der Zählung verworfen. Der pH-Wert des Fliegenmediums wurde für die Btk -Dosis-Wirkungen gemessen; weder das Vorhandensein der Btk- Formulierung noch die Dosis veränderten sie (Supplementary Information S4 ).

Fitnessbezogene Merkmale bei Erwachsenen
Für Langlebigkeits- und Gesamtnachkommenzahlmessungen wurden D. melanogaster Canton S-Eier aus der Masseneiablage in mehrere Fläschchen mit proteinarmem/zuckerreichem Medium, gemischt mit 5 × 10 6 , 5 × 10 7 oder 10 8 KBE/g DELFIN , überführt A. Für jede Dosis wurden Fliegen aus den Fläschchen 2 Tage nach dem Schlüpfen gepoolt und Gruppen von 15 Männchen und 15 Weibchen wurden auf dasselbe Medium ohne DELFIN überführtA. Die Fliegen wurden alle 3–4 Tage in ein neues Fläschchen überführt und frühere Fläschchen wurden inkubiert, damit sich die Nachkommen entwickeln konnten. Sterblichkeit und Geschlecht toter Fliegen wurden täglich aufgezeichnet, bis die letzte Fliege starb. Die Anzahl der Nachkommen wurde vom ersten Auftauchen bis zum Erscheinen der Puppen der nächsten Generation gezählt. Es wurden zwei Versuchsblöcke gesetzt. Aufgrund von Unterschieden in der Versuchsdauer wurden die Nachkommenzahlen aller Fläschchen jeder Dosis von DELFIN A für jeden Versuchsblock aufsummiert.

Dialyse und Cry-Toxin-Analyse
Bei manchen Produkten können Zusatzstoffe schädlicher sein als der Wirkstoff 70 . Um in der Formulierung vorhandene niedermolekulare Additive zu eliminieren, wurde eine DELFIN A-Suspension mit 2 × 10 10 CFU gegen PBS (KH 2 PO 4 1 mM, Na 2 HPO 4 (2H 2 O) 3 mM, NaCl 154 mM, pH dialysiert 7.2), über Nacht bei 4 °C, unter Verwendung einer 8–10 kDa Cut-off-Membran (ZelluTrans, Roth). Die CFUs der dialysierten Suspension wurden wie oben geschätzt. Die Auswirkungen auf die Schlupfrate (ER) und Entwicklungszeit (DT) von D. melanogaster Canton S wurden an 20 Eiern bei 10 7 , 10 8 und 10 9 analysiert KbE/g dialysierte sowie zentrifugierte Suspension gemischt mit 2 g protein-/zuckerreichem Fliegenmedium. Die dialysierte Suspension wurde einer 12,5 % SDS-PAGE unterzogen und nach Silberfärbung mit der nicht-dialysierten Suspension verglichen. Das Vorhandensein von Cry1A-Protoxinen, aktivierten Toxinen und Toxinfragmenten wurde durch Western-Blot unter Verwendung eines hauseigenen polyklonalen Anti-Cry1A-Kaninchen-Antikörpers untersucht.

Datenanalyse
Die Daten wurden mit Mixed-Effects-Modellen mit Wiederholungen als Zufallseffekten analysiert. Dosis der Btk - Formulierung/Sporenproduktion, D. melanogaster - Stamm, Drosophila -Spezies oder Entwicklungsstadium, experimentelle Blockierung, falls erforderlich, und geeignete 2-Wege-Wechselwirkungen zwischen diesen Faktoren wurden als feste Wirkungen eingeschlossen. Die wichtigsten festen Effekte und ihre Wechselwirkungen wurden mit Log-Likelihood-Ratio-Tests getestet. Paarweise Post-hoc-Vergleiche wurden für D. melanogaster -Stämme, Formulierungs-/Sporenbehandlungen und zwischen der Kontrolle und den anderen Dosen durchgeführt.

Daten zur Emergenzrate, Geschlechterverhältnis und Larvenüberleben wurden mit verallgemeinerten linearen Modellen mit Binomialverteilung und Logit-Link analysiert; Für die Daten zur Emergenzrate wurde das Modell auch Bias-korrigiert, um mehrere 0-Werte zu korrigieren, und mit Wiederholung als Zufallseffekt. Um die Post-hoc- Analyse durchzuführen, wurde dasselbe Modell einschließlich Wiederholungen als fester Effekt auf die Daten der Emergenzrate angewendet und lieferte ähnliche Ergebnisse. Entwicklungszeit (1/x transformiert) und Nachkommenzahl wurden mit linearen Modellen analysiert. Die Daten zur Langlebigkeit von Erwachsenen wurden mit Proportional-Hazard-Cox-Regressionsmodellen analysiert, einschließlich Fliegengeschlecht und Formulierungsdosis als feste Effekte und Replikation als Zufallseffekt. Analysen wurden in R 71 mit den Paketen lme4 72 , brglm durchgeführt73 , Multcomp 74 , Survival 75 und Coxme 76 .

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Danksagungen
Wir danken Xiao Han, Jingru Li und Abir Oueslati für die Hilfe bei Vorversuchen, L. Kremmer, C. Rebuf und O. Magliano für die Bereitstellung und Aufzucht von Fliegen und Hilfe bei der Vorbereitung des Fliegenmediums, A. Brun-Barale für die Produktion von Bacillus subtilis Sporen, D. Pauron für die Herstellung des Cry1A-Toxins, Hugo Mathé-Hubert für Ratschläge zu statistischen Analysen und M. Amichot für hilfreiche Diskussionen. Der Cry1A-Antikörper wurde in Zusammenarbeit mit der INRA-PFIE-Plattform (Nouzilly, Frankreich) hergestellt.

Finanzierung
Diese Arbeit wurde von der französischen Nationalagentur für Forschung (ANR-13-CESA-0003-001 ImBio), dem Siebten Rahmenprogramm der Europäischen Union für Forschung, technologische Entwicklung und Demonstration unter der Finanzhilfevereinbarung Nr. 613678 (DROPSA), dem „Investments for the Future" LABEX SIGNALIFE (ANR-11-LABX-0028), das INRA Plant Health Department (an MPNE und JLG), das CNRS (an AG) und die Universität Nice Côte d'Azur (an MP).

Informationen zum Autor
Anmerkungen des Autors
Diese Autoren haben zu gleichen Teilen beigetragen: Jean-Luc Gatti und Marylène Poirié.

Autoren und Zugehörigkeiten
Institut Sophia Agrobiotech, Université Côte D'Azur, INRAE, CNRS, ISA, 400 route des chappes, 06903, Sophia Antipolis, Frankreich

Aurélie Babin, Marie-Paule Nawrot-Esposito, Armel Gallet, Jean-Luc Gatti & Marylène Poirié

Beiträge
AB, MPNE, AG, JLG und MP entwarfen die Experimente. AB führte die Experimente mit Beiträgen von MPNEAB durch, führte die statistischen Analysen durch und erstellte die Zahlen. AB, JLG und MP haben das Manuskript mit Beiträgen aller Autoren verfasst.

Korrespondierender Autor
Korrespondenz mit Jean-Luc Gatti .

Ethik-Erklärungen
Konkurrierende Interessen
Die Autoren erklären keine konkurrierenden Interessen.

Weitere Informationen
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Babin, A., Nawrot-Esposito, MP., Gallet, A. et al. Differenzielle Nebenwirkungen des Bioinsektizids Bacillus thuringiensis auf Nichtziel- Drosophila - Fliegen. Sci Rep . 10, 16241 (2020). https://doi.org/10.1038/s41598-020-73145-6

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Empfangen
31. Dezember 2019

Akzeptiert
07.09.2020

Veröffentlicht
01. Oktober 2020

DOI
https://doi.org/10.1038/s41598-020-73145-6

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Symptombeschwerden nach Sprühen aus der Luft mit dem biologischen Insektizid Foray 48B
Keith Petri 1, Markus Thomas , Elisabeth Broadbent
Zugehörigkeiten erweitern
PMID: 12658313
Abstrakt
Ziel: Untersuchung der Wirkung des Sprühens von Bacillus thuringiensis (Foray 48B) aus der Luft auf selbstberichtete Symptombeschwerden, Gesundheitswahrnehmungen und Besuche bei Gesundheitsdienstleistern.

Methoden: Zweihundertzweiundneunzig Einwohner der Sprühzone des Ministeriums für Land- und Forstwirtschaft (MAF) in West Auckland wurden zehn Wochen vor dem ersten Sprühen aus der Luft durch eine Tür-zu-Tür-Umfrage von Häusern in dem am intensivsten besprühten Gebiet rekrutiert. Die Teilnehmer füllten eine Symptom-Checkliste und einen Fragebogen zur Messung der Gesundheitswahrnehmung aus. Drei Monate nach Beginn des Sprühens antworteten 181 (62 %) der ursprünglichen Teilnehmer auf einen ähnlichen postalischen Fragebogen. Symptomberichte, Gesundheitswahrnehmungen und Besuche bei Gesundheitsdienstleistern wurden zwischen dem Baseline- und dem Follow-up-Fragebogen verglichen. Die Raten der Symptombeschwerden bei Befragten mit zuvor diagnostiziertem Asthma, Heuschnupfen oder anderen Allergien wurden mit denen bei Befragten ohne diese Vorerkrankungen verglichen.

Ergebnisse: Symptombeschwerden nahmen nach dem Sprühen aus der Luft signifikant zu, insbesondere: Schlafstörungen, Schwindel, Konzentrationsschwierigkeiten, gereizter Hals, juckende Nase, Durchfall, Magenbeschwerden und Gasbeschwerden. Analysen zeigten eine signifikante Zunahme der Symptome bei den Teilnehmern mit Heuschnupfen in der Vorgeschichte. Während sich die allgemeine Selbsteinschätzung der Gesundheit nach dem Sprühen verschlechterte, sahen die meisten Bewohner ihre Gesundheit durch das Sprühprogramm nicht beeinträchtigt, und es gab keinen signifikanten Anstieg der Besuche bei Allgemeinmedizinern oder alternativen Gesundheitsdienstleistern.

Schlussfolgerungen: Das Sprühen aus der Luft mit Foray 48B ist mit einigen nachteiligen gesundheitlichen Folgen in Bezug auf eine signifikante Zunahme der Symptome der oberen Atemwege, des Magen-Darm-Trakts und der neuropsychiatrischen Symptome sowie einer Verringerung der allgemeinen Wahrnehmung der Gesundheit in der exponierten Bevölkerung verbunden.

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Und sollte ich vergessen haben, jemanden zu beschimpfen, dann bitte ich um Verzeihung!
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